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噴霧干燥機一個地高辛配基
時間:2016/11/29 9:30:07 瀏覽:

標(biāo)記 !!光敏生物素("#$%$&’$%’()是一種光敏化合物,通過一個連接臂,一端連接生物素,另一端連接化學(xué)性質(zhì)活潑的光敏基團。在強可見光下,光敏基團與核苷酸特定部位共價結(jié)合,合成光敏生物素標(biāo)記探針。 !!(三)地高辛標(biāo)記物 !!地高辛()’*$+’*,(’(,-’*)是類固醇半抗原化合物,通過一個 ..個碳原子的交聯(lián)臂與尿嘧啶核苷酸的嘧啶環(huán)上的第 /位碳相連,形成地高辛標(biāo)記的尿嘧啶核苷酸。地高辛標(biāo)記的效率高,一般每 01 20/個核苷酸((%)中就帶噴霧干燥機一個地高辛配基,雜交后又有靈敏的免疫酶學(xué)檢測系統(tǒng),靈敏度高,有取代生物素標(biāo)記探針的趨勢。 !!(四)分子信標(biāo) !!分子信標(biāo)(3$4,56478 &,75$()是根據(jù)核酸堿基配對原則和熒光共振能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象設(shè)計的。分子信標(biāo)長約 0/ (%,空間結(jié)構(gòu)呈莖環(huán)形,其中環(huán)序列是和靶核酸互補的探針,莖長 / 29 (%,由與靶序列無關(guān)的互補序列構(gòu)成,莖的一端連上一個熒光分子,另一端連上一個淬滅分子( :6,(5#,8)。當(dāng)無靶序列時,分子信標(biāo)呈莖環(huán)結(jié)構(gòu),熒光分子和淬滅分子非常接近,熒光分子發(fā)出的熒光被淬滅分子吸收并以熱的形式散發(fā),檢測不到熒光信號。當(dāng)有靶序列存在時,分子信標(biāo)的環(huán)序列和靶序列特異的結(jié)合,形成的雙鏈比莖環(huán)結(jié)構(gòu)更穩(wěn)定,熒光分子和淬滅分子分開,熒光分子發(fā)出的熒光不被淬滅分子吸收,則可檢測到熒光。二、分子雜交的方法 !!分子雜交分為固相雜交、液相雜交和固相液相雜交。

固相液相雜交是把欲檢測的核酸樣本或探針先結(jié)合到固相載體上,再與液體中的探針或核酸樣品進行雜交反應(yīng),漂洗去除未反應(yīng)的探針或核酸樣品,經(jīng)檢測雜交信號,判斷雜交結(jié)果。 !!(一)斑點雜交 !!斑點雜交()$% &4$% #;&8’)’<7%’$()是將>?或 ->?變性后直接點樣在硝酸纖維素膜上,探針放在雜交液內(nèi)進行雜交。方法簡便、快速、靈敏,用于特定基因的定性分析。 ! ! ->?點陣(->? 7887;)是將相關(guān)的探針按順序點在硝酸纖維素膜上,待檢樣品放在雜交液內(nèi),檢查樣品中的核酸能和哪一個探針雜交。 !!基因芯片(*,(, 5#’"@)是將探針點在硅片上,待測樣品放在雜交液內(nèi)進行雜交,借助計算機判斷樣品中的核酸能和哪一個探針雜交。 ->?點陣和基因芯片點在固相上的是探針的序列,沒有進行標(biāo)記。待測核酸樣品在雜交前進行標(biāo)記。 !!斑點雜交、 ->?點陣、基因芯片主要是確定待檢樣品中有沒有所要的核酸。 !!(二)原位雜交 !!原位雜交

(’( @’%6 #;&8’)’<7%’$()是用核酸探針與細(xì)胞和組織切片中的核酸進行雜交并對其進行檢測>?分子經(jīng)限制酶切,在瓊脂糖凝膠上電泳使 ->?片段依據(jù)相對分子質(zhì)量大小分開,再將電泳結(jié)果從凝膠中轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上,經(jīng)固定和變性后,在膜上與探針進行雜交,確定電泳條帶中哪一條是所要的 ->?。開始將瓊脂糖上的 ->?條帶轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上,采用的是用吸墨汁紙吸水(&4$%%’(*)的方法(見圖 .9 9?)。英國愛丁堡大學(xué)的 B)C’( A$6%#,8(博士 第十七章 /基因技術(shù)!"!建立了此方法, !"#$%&’(印跡雜交由此得名,F(xiàn)在將 )*+轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上多采用轉(zhuǎn)移電泳的方法(見圖 ,--.)。圖 ,--/ !"#$%&’(印跡雜交 //(0)*"’$%&’(印跡雜交( ("’$%&’( 12"$$3(4)/ *"’$%&’(印跡雜交是經(jīng)典的 5*+分析法。操作方法和 !"#$%&’(印跡雜交方法基本相似,是將 5*+經(jīng)電泳分開后轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上進行雜交。 //(6)7&8$&’(印跡雜交(9&8$&’( 12"$$3(4)/ 7&8$&’(印跡雜交是將蛋白質(zhì)經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上,檢測哪一種蛋白質(zhì)能和抗體反應(yīng),也叫免疫印跡技術(shù)。第三節(jié) /聚合酶鏈反應(yīng)


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